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　　一、背景及目的

　　Simoa HD-X進行樣本檢測過程中，在樣本體積充足情況下可自動完成4×稀釋操作，但在實際檢測過程中會存在多種樣本稀釋模式，本次測試是為確定同一樣本經(jīng)不同稀釋方法/人員操作后對檢測數(shù)據(jù)結(jié)果是否存在影響，以指導(dǎo)后續(xù)生產(chǎn)實驗中的樣本處理操作。

　　二、實驗設(shè)計

　　1、樣本準(zhǔn)備：

　　測試所用樣本為早期客戶提供的剩余血漿，便于后期比對數(shù)據(jù)所有測試條件均使用同一血漿樣本完成：800μl血漿樣本，混勻，10000g離心5min，取中段澄清分裝3管，每管250μl，于-80℃保存?zhèn)溆谩?/span>

　　2、樣本處理條件：

　　相同分裝的3管樣本分別由3人使用相同試劑進行相同稀釋操作，具體稀釋操作為：①儀器4×稀釋②手動4×稀釋③手動4×+儀器4×稀釋④手動16×稀釋⑤手動64×稀釋。

　　3、上機檢測：

　　使用Simoa C3PA Advantage Kit(502324)進行實驗，所有測試樣本均一同上機，所有標(biāo)曲點與樣本一同2重復(fù)參與上機檢測，試劑盒內(nèi)參不參與上機檢測，詳見下表：

　　三、實驗操作流程：按Quanterix C3PA protocol及實驗室常規(guī)技術(shù)服務(wù)流程

　　四、實驗測試數(shù)據(jù)：

　　注：由于使用三重試劑盒，共有3個因子的測試數(shù)據(jù)，為避免數(shù)據(jù)混亂，以下僅展示TNF-α測試數(shù)據(jù);1.TNFα標(biāo)曲數(shù)據(jù)：

　　標(biāo)曲R2及CV等質(zhì)控參數(shù)均正常

　　2、樣本數(shù)據(jù)

　　(1)相同稀釋條件下不同人員操作數(shù)據(jù)差異分析：

　　結(jié)論1：由現(xiàn)有數(shù)據(jù)得出，稀釋倍數(shù)<64倍時，cv值在10%以內(nèi)。

　　(1)相同稀釋倍數(shù)，手動/儀器稀釋檢測數(shù)據(jù)差異分析;

　　4×稀釋條件

　　16×稀釋條件

　　結(jié)論2：手動/儀器稀釋相同倍數(shù)，三位操作人員CV值均在10%以下;

　　結(jié)論3：4×與16×稀釋檢測結(jié)果存在差異，后續(xù)或需進一步驗證;

　　(1)手動稀釋倍數(shù)遞增(4×、16×、64×)與儀器稀釋檢測數(shù)據(jù)差異分析

　　結(jié)論4：手動稀釋cv值較大，未做儀器的梯度稀釋，暫不能判斷是否cv值與稀釋倍數(shù)呈正相關(guān)。

　　(1)選擇儀器稀釋4×作為陽性對照，比較不同稀釋倍數(shù)下檢測數(shù)據(jù)差異

　　結(jié)論5：以儀器稀釋4倍為陽性對照，除與手動4×間cv值<10%，其余cv值均在>20%。

　　五、初步結(jié)論

　　現(xiàn)有測試數(shù)據(jù)可見，樣本稀釋倍數(shù)建議在4×內(nèi)進行，稀釋倍數(shù)升高或?qū)е聰?shù)據(jù)準(zhǔn)確性偏差。