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　　中國團(tuán)隊：首次基于Simoa平臺檢測單囊胚培養(yǎng)液中細(xì)胞因子水平

　　來自深圳中山泌尿外科醫(yī)院的研究者，基于Simoa平臺同時檢測單囊胚培養(yǎng)液中IL-6、IL-10、TNF-α三種細(xì)胞因子水平，并對比其與胚胎質(zhì)量及定植結(jié)果的關(guān)系。

　　01、背景

　　在體外培養(yǎng)過程中，在著床前胚胎會向胚胎培養(yǎng)基中分泌一些細(xì)胞因子，如IL-6、IL-10、TNF-α，這些細(xì)胞因子水平可能對胚胎發(fā)育潛能或妊娠結(jié)局有預(yù)測作用。本研究旨在利用SIMOA平臺檢測單個囊胚條件培養(yǎng)液(single-blastocyst conditioned medium,SBCM)中IL-6、IL-10和TNF-α的濃度，并探討這三種細(xì)胞因子濃度與胚胎質(zhì)量及后續(xù)胚胎移植結(jié)局的關(guān)系。

　　單位：深圳中山泌尿外科醫(yī)院

　　02、研究方法

　　2組樣本：第一組，38個SBCM樣本，比較IL-6、IL-10、TNF-α水平與囊胚質(zhì)量(優(yōu)質(zhì)和非優(yōu)質(zhì))、囊胚形成時間(D5和D6)的關(guān)系;第二組：61個D5移植的優(yōu)質(zhì)囊胚SBCM樣本，比較IL-6水平與胚胎是否成功植入(植入和未植入)的關(guān)系。

　　從IVF / ICSI周期中收集30uLSBCM樣本，排除標(biāo)準(zhǔn)如下：(a)女性年齡> 38歲;(b)接受ART治療多于一個周期;(c)微刺激方案;(d)在第3天(D3)少于4個來自2PN正常受精卵的優(yōu)質(zhì)(TQ)胚胎，(e)接受單基因疾病和PGT-A的植入前遺傳學(xué)診斷。

　　胚胎質(zhì)量評分，經(jīng)形態(tài)學(xué)評分，分為優(yōu)質(zhì)囊胚(top-quality, TQ)和非優(yōu)質(zhì)囊胚(non-top quality, NTQ)。

　　經(jīng)陰道超聲觀察子宮內(nèi)的孕囊確定是否植入成功。

　　基于全自動SimoaHD-1平臺檢測SBCM樣本中的IL-6、IL-10、TNF-α水平，試劑盒是SIMOACytokine 3-plex A kit，IL-6、IL-10、TNF-α的檢測限分別是0.0060pg/ml,0.0022pg/ml, 0.0110pg/ml。

　　03、結(jié)果

　　第一組38個樣本中，IL-6，IL-10，TNF-α檢出率分別為 100% (38/38), 50% (19/38), 63% (24/38)，用于數(shù)據(jù)分析的樣本數(shù)量分別為 38，16，24。結(jié)果表明，TQ與NTQ的IL-6、IL-10和TNF-α濃度無顯著性差異(圖1 a-c);D6與D5相比具有更高的IL-6濃度(圖 1d)，而D5和D6之間的IL-10和TNF-α濃度沒有顯著差異(圖1e.f)

　　圖1. 來源于不同質(zhì)量(TQ和NTQ)囊胚或形成時間(D5和D6)囊胚的SBCM中IL-6、 IL-10和TNF-α濃度 NS，不顯著，*P<0.05

　　38個SBCMs中的IL-6濃度在各亞組中進(jìn)行分析，如圖2所示，D6-TQ囊胚SBCM中IL-6的濃度明顯高于D5-TQ囊胚(P<0.05 )。此外，Spearman分析顯示SBCM中IL-6濃度與D5囊胚的胚胎質(zhì)量呈顯著負(fù)相關(guān)，而與D6囊胚的胚胎質(zhì)量則呈顯著正相關(guān).

　　圖2. 各亞組間SBCM中IL-6的濃度的比較。D5-TQ，第5天優(yōu)質(zhì)胚胎;D5-NTQ，第5天非優(yōu)質(zhì)胚胎;D6-TQ，第6天優(yōu)質(zhì)胚胎;D6-NTQ，第6天非優(yōu)質(zhì)胚胎。NS，不顯著;*P<0.05

　　為探討IL-6對胚胎移植潛能的預(yù)測價值，從D5移植的單個TQ囊胚中收集61個SBCMs樣本，根據(jù)胚胎移植結(jié)果進(jìn)行分析。兩組的人口統(tǒng)計學(xué)特征，包括年齡、體重指數(shù)、不孕持續(xù)時間、Gn劑量、原發(fā)性不孕比例和ICSI均無無顯著差異。源自植入成功與植入失敗兩組胚胎SBCM的IL-6濃度無顯著性差異(圖3)。

　　圖3. 植入和未植入胚泡的SBCM中IL-6的濃度

　　04、結(jié)論

　　成囊時間不同的囊胚SBCM中IL-6濃度與囊胚質(zhì)量有關(guān)。然而，SBCM中IL-6的濃度可能與囊胚植入潛能無關(guān)。

　　參考文獻(xiàn)：Huixian Zhong, Qing Sun, PeilinChen, et al. Detection of IL-6, IL-10,and TNF-α level in human single-blastocyst conditioned medium usingultrasensitive Single Molecule Array platform and its relationship with embryoquality and implantation: a pilot study. Journal of Assisted Reproduction andGenetics. May 2020.

　　Simoa細(xì)胞因子試劑盒(部分)

　　目前推出的Simoa試劑盒有 80+ 種，常見的細(xì)胞因子均有，有單重也有多重試劑盒，檢測物種有人和小鼠。靈敏度均在fg/ml 級別，節(jié)約樣本，數(shù)據(jù)可靠。以下列出了部分人的細(xì)胞因子試劑盒: